葡聚糖凝胶是一种珠状的凝胶，含有大量的羟基，很容易在水中和电解质溶液中溶胀。亲水基质使其非特异性吸附最小化，并在生物分子分离期间得到较高的回收率。G型的葡聚糖凝胶有各种不同的交联度，因此它们的溶胀度和分级分离范围也有所不同。葡聚糖凝胶的溶胀度基本上不因盐和洗涤剂的存在而受影响。

葡聚糖凝胶有不同的粒度。超细级的葡聚糖凝胶是用于需要极高分辨率的柱色谱和薄层色谱。粗级和中级的凝胶用于制备性色谱过程，可在较低的压力下获得较高的流速。另外，粗级也可用于批量工艺。

不同规格特性：

细颗粒：流速慢，分离效果最优。
粗颗粒：流速快，分离效果偏差。
中颗粒：流速适中，分离效果适中，一般客户最常选用此型号。

未处理的填料，室温密闭保存。使用完的填料，用纯水将盐分彻底冲洗，最后保存在20%乙醇中，4℃

• 上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的正常使用。所有的缓冲液均需要用0.45μm的过滤器过滤。
  

• 在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于0.1摩尔。碱会使流速变慢。
  

• 不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。

Sephadex系列产品以干粉形式存在，使用前必须溶胀，在膨胀期间应避免过度搅拌，因为它可能破坏填料，不要使用磁力搅拌器。

• 填料的准备
  

• 将填料在过量去离子水或缓冲液中，室温条件下膨胀24 - 4 8小时，或用热水膨胀1～3小时（不要水浴！）。洗脱缓冲液不应含有高粘度的试剂。溶胀完毕后，如果上层有少量漂浮物，请去除。
  

• 将溶胀好的填料，所有的缓冲液等材料平衡至实验操作温度，对所有的缓冲液进行脱气处理。

• 装柱
  

• 检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
  

• 将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
  

• 用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
  

• 打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。

• 平衡
  上样前平衡层析柱至少5～10个柱体积直到记录仪基线变得平稳为止（流出液的pH值和电导值等于上柱的Buffer的pH值和电导值）。
  

• 上样
  样品一定要离心或过滤后（0.45μm滤膜）上样。
  凝胶过滤的上样量一般为不大于5%的柱床体积，我们建议初次上样控制在1～2%的柱床体积，视分离情况可以调整；脱盐时上样量可以达到20%的柱床体积，柱高的选择也与分离要求相关，柱子越高，分离效果相应越好，但是，柱高过高的凝胶柱会引较大的反压，也应当尽可能避免。难分离物质要有一定柱高和流速控制，脱盐时高径比为5：1即可。
  

• 洗脱方法
  可以用无盐水，也可以采用上柱时的缓冲液洗脱。
  

• 在位清洗（CIP）
  凝胶使用十次后作一次CIP，目的是去除柱床内沉淀的及顽固残留的蛋白。方法是用0.1M氢氧化钠洗2个柱体积，再以至少10个柱体积平衡缓冲液再生。