2023-10-25 15:54:56
外泌体提取试剂盒
外泌体(exosomes)是一种能被机体内大多数细胞分泌的直径大约为 30 ~ 150 nm 的具有脂质双层膜的微小膜泡。它广泛存在并分布于各种体液中,携带和传递重要的信号分子,形成了一种全新的细胞间信息传递系统,影响细胞的生理状态并与多种疾病的发生与进程密切相关。
德尔塔生物外泌体提取试剂盒提供了一种简单可靠的方法可从细胞培养上清液,血清,血浆,乳液,尿液,唾液、酵母、植物中提取完整的外泌体。本产品提取的外泌体囊泡适用于下游的电镜分析、NTA分析、纳米流式(NanoFCM)分析、Western Blot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。
方法对比
研究外泌体内涵成分的前提是对其进行高质量的提取,由于外泌体粒径较小且与多种其他生物分子混合在一起,导致其分离纯化困难,阻碍了对其的进一步研究。
近年来,研究人员根据外泌体理化性质研发了多种分离纯化方法:常用的有超速离心法、密度梯度超速离心法、超滤法、多聚物沉淀法(PEG)、免疫磁珠法、试剂盒分离法等。
而对于外泌体的分离,首先要关注外泌体的提取质量,包括纯度、囊泡状态、得率及重复性等方面的评估,然后才是技术路线的选择。
纯化方法 | 外囊泡纯度 | 囊泡状态 | 可操作性 | 回收量 | 重复性 | 设备要求 |
---|---|---|---|---|---|---|
超速离心法 | ★★ | ★★ | ★★★ | ★★ | ★ | 超速离心机 |
密度梯度离心法 | ★★★★ | ★★ | ★ | ★ | ★ | 超速离心机 |
超滤法 | ★★ | ★★★ | ★★★ | ★★ | ★★ | 普通离心机 |
多聚物沉淀法 | ★ | ★★ | ★★★★ | ★★★★ | ★★ | 普通离心机 |
抗体亲和纯化 (磁珠) | ★★★ | ★ | ★★★ | ★★ | ★★★★ | 普通离心机+磁铁架 |
华美生物 外泌体纯化法 | ★★★ | ★★★ | ★★★ | ★★★ | ★★★★ | 普通离心机 (配套浓缩管) |
1. 超速离心法是最常用的外泌体纯化手段,目前已发表文献引用最多的方法,采用低速离心、高速离心交替进行,可分离到大小相近的囊泡颗粒。
优点:无需特殊试剂,操作简便,适合大批量样本。
缺点:耗时耗力,纯度相对较低,回收率不稳定,重复离心会一定程度损伤外泌体,设备要求高。
2. 密度梯度超速离心法是在超速离心力作用下,使蔗糖溶液形成从低到高连续分布的密度阶层,是一种区带分离法。通过密度梯度离心,样品中的外泌体将在1.13-1.19g/mL的密度范围富集。
优点:纯度相对较高,适合大批量样本。
缺点:步骤繁琐,耗时,回收率不稳定,重复离心会一定程度损伤外泌体,设备要求高。
3. 超滤法是将溶剂及小分子物质过滤到膜的另一侧,而将相对大分子物质截留在超滤膜上,以达到分离的目的。
优点:简单高效,不影响外泌体的完整性。
缺点:外泌体可能会阻塞过滤孔,导致膜的寿命减短,分离效率和纯度较低。此外,截留在膜上的外泌体间也会发生粘附,导致产量降低。
4. 多聚物沉淀法根据化合物与外泌体的理化特性,利用共沉淀或者反向筛选的方式对外泌体进行分离纯化。
优点:操作简单、耗时短、无设备限制。
缺点:纯度较低,存在假阳性(杂蛋白较多或一些难以去除的聚合物),机械力或化学添加物对外泌体产生破坏,存在于分离物中的聚合物也可能会干扰下游分析等。
5. 抗体亲和(磁珠)法利用包被单克隆抗体的磁珠结合外泌体,外泌体表面有其特异性标记物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗标记物抗体的磁珠与外泌体囊泡孵育后结合,即可将外泌体吸附并分离出来。
优点:纯度较高,特异性和重复性好、操作简便、无设备限制。
缺点:效率和回收率较低,仅能捕获表达特定抗原的目标外泌体,外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响,囊泡完整性影响较大。
综上所述,现有技术的方法提取到的外泌体,缺陷在于:收率较低,耗时长、纯度不高,外泌体囊泡不完整等。
鉴于上述问题,德尔塔生物匠心研发的外泌体提取试剂盒通过蛋白亲和的方式分离外泌体,无需超速离心即可实现高效率地从各种类型样本中提取高纯度、囊泡结构完整的外泌体,具有简便、稳定、易操作的优点。
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