Phalloidin-TRITC是一种红橙荧光细胞骨架染色剂，它结合并标记F-actin（激发/发射最大值λ~540/565nm）。建议将小瓶内容物溶于1.5毫升甲醇或二甲基亚砜中，制成本品的储备溶液。
产品名称：罗丹明标记鬼笔环肽|TRITCPhalloidin
分子式：C60H70N12O13S2
分子量：1231.4
CAS：915013-10-4
结构式：
915013-10-4结构式
运输与保存方法：冰袋运输。-20℃避光干燥保存，1年有效。
需要自备材料：
1）（可选）甲醇
2）1×PBS缓冲液,pH7.4,细胞培养级别
3）固定液4%多聚甲醛（溶于PBS缓冲液）
4）丙酮或透化液0.5%TritonX-100（溶于PBS缓冲液）
5）Fluoromount-GTM水溶性封片剂（不含DAPI）DAPI
6）（可选）DAPIFluoromount-GTM水溶性封片剂（含DAPI）
7）（可选）BSA，标准级
8）载玻片和盖玻片
9）盖玻片周围密封液（如透明指甲油）
10）组装有TRITC激发/发射滤片，以及DAPI激发/发射滤片的荧光显微镜或共聚焦显微镜。操作步骤：
1.工作液准备
1）对于TRITC标记鬼笔环肽
本品以溶于甲醇的20M储存液形式提供，总量为300L。按照100nM的工作液浓度来换算，可制备总量为60mL的工作液。建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。
2）对于TRITC标记鬼笔环肽
本品以冻干粉形式提供，分子量为1231.4，总量为1mg。可先用甲醇或者DMSO充分溶解配制成20~100M的储存液。如，加入8.1208mL甲醇到1mg鬼笔环肽即得到100M等量的储存液，根据单次使用量，进行小量分装，-20℃避光冻存，一年稳定。开始实验前，使用1×PBS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。推荐工作浓度为：80~200nM。工作液现配现用。
2.染色步骤
1）细胞爬片生长24h，使其密度达到50%汇合度。
2）吸掉培养液，37℃预热的1×PBS（pH7.4）清洗细胞2次。
3）使用溶于PBS的4%甲醛溶液进行细胞固定，室温固定10min。
注：避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白。
4）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。
5）室温条件下，用丙酮（≤-20℃）脱水或者用0.5%TritonX-100溶液透化处理5min。
6）室温条件下，用PBS清洗细胞2~3次，每次10min。
7）取200l配制好的TRITC标记鬼笔环肽工作液，覆盖住盖玻片上的细胞，室温避光孵育30min（通常情况下，4℃~37℃孵育皆可）。
注：为了降低背景，可于TRITC标记的鬼笔环肽工作液内加入1%BSA；另外，孵育过程中为了避免溶液挥发，可将盖玻片转移到一个密封的容器内。
8）用PBS清洗盖玻片3次，每次5min。
9）使用200lDAPI溶液（浓度：100nM）对细胞核进行复染，约30s。
10）用PBS清洗盖玻片，然后倒置在已经滴有一滴Fluoromount-GTM水溶性封片剂的载玻片上。使用纸巾轻轻檫掉多余封片剂，然后用指甲油永久封片。此法制备的标本玻片可置于4℃避光保存，通常6个月内可继续做F-actin染色分析。
注：也可以直接使用含有DAPI的抗荧光淬灭封片剂合并步骤9）10），简化步骤。
11）荧光显微镜或者共聚焦显微镜下进行荧光观察，选择TRITC激发/发射滤片（Ex/Em=545/570nm）和DAPI激发/发射滤片（Ex/Em=364/454nm）。
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