生物素标记_荧光标记
生物素理化性质:
中文名称:D-生物素,英文名称:D-Biotin,CAS号:58-85-5,分子式:C10H16N2O3S,分子量:244.31 ,熔点231-233°C(lit.)
比旋光度89º(c=1,0.1NNaOH),沸点573.6±35.0°C(Predicted),密度1.2693(roughestimate),折射率90.5°(C=2,0.1mol/LNaOH),储存条件-20°C
水溶解性:SolubleChemicalbookinhotwater,dimethylsulfoxide,alcoholandbenzene.
敏感性:LightSensitive
稳定性:Stable,butlightsensitive.Incompatiblewithstrongoxidizingagents,strongbases,strongacids,formaldehyde,chloramine-T,nitrousacid.
生物素标记的优点:
生物素是动、植物体内广泛分布的一种小分子生长因子,又名辅酶R或维生素H,其难溶于水,易溶于二甲基甲酰胺。生物素可与亲和素(动物微生物中提取的一种含10%碳水化合物的碱性糖蛋白)或链霉亲和素(链球菌属的菌培养液中提取的一种蛋白质)紧密特异结合,进一步形成一种新的生物扩增系统:生物素-亲和素系统(biotin-avidin system,BAS)。生物素具有快速,特异性好和低分子量(MW=244.31 g/mol)等优点,并且不影响分子的天然功能。
生物素标记具有亲和力高和多级扩增的优势,并且可与免疫荧光技术结合,如荧光素,酶和同位素等等。它是许多生物医学研究的有效工具,如各种示踪免疫测定,免疫标记,蛋白质标记,分子杂交和核酸探针标记。其中,核酸杂交技术广泛应用于医学科学研究和临床医学,但在应用于核酸探针之前,必须使用同位素或生物素标记。同位素标记探针具有非常短的半衰期并且对人的健康有害,而生物素标记更稳定,准确和方便,可用于各种检测系统,同时也可以避免放射性同位素对人体造成的伤害。
BAS在实际应用中所具有的巨大优越性,主要表现在以下几个方面。
灵敏度
生物素容易与蛋白质和核酸类等生物大分子结合,形成的生物素衍生物,不仅保持了大分子物质的原有生物活性,而且比恬度高,具多价性。此外,每个亲和素分子有四个生物素结合部位,可同时以多价形式结合生物素化的大分子衍生物和标记物。因此,BAS具有多级放大作用,使其在应用时可极大地提高检测方法的灵敏度。
特异性
亲和素与生物素间的结合具有极高的亲和力,其反应呈高度专一性。因此,BAS的多层次放大作用在提高灵敏度的同时,并不增加非特异性干扰。而且,BAS结合特性不会因反应试剂的高度稀释而受影响,使其在实际应用中可最大限度地降低反应试剂的非特异作用。
稳定性
亲和素结合生物素的亲和常数可为抗原-抗体反应的百万倍,二者结合形成复合物的解离常数很小,呈不可逆反应性;而且酸、碱、变性剂、蛋白溶解酶以及有机溶剂均不影响其结合。因此,BAS在实际应用中,产物的稳定性高,从而可降低操作误差,提高测定的精确度。
普适性
生物素-亲和素系统的多功能性还能提供一套统一的研究方法。例如对于某待测分子,已经得到了对于该分子的生物素标记抗原,那么配合结合亲和素的胶体金可以在电镜下观测,配合结合荧光标记的亲和素可以使用流式细胞仪筛选,配合连接到酶的亲和素可以进行ELISA等免疫组化实验。
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